熒光定量PCR（qPCR）技術基于實時熒光信號監測核酸擴增過程，可實現病原體的定性與定量分析，具有靈敏度高、特異性強、檢測快速等優勢，已成為現代疫病診斷的核心技術之一。儀器性能是影響qPCR檢測結果可靠性的關鍵因素，需具備精準的溫度控制（升降溫速率、孔間溫度均一性）、穩定的熒光檢測系統（激發光強度、信號采集靈敏度）及便捷的數據分析功能。博清生物科技（南京）有限公司作為國內領先的分子診斷設備研發企業，其推出的熒光定量PCR儀在溫度控制精度（±0.3℃）、升降溫速率（最大6℃/s）及熒光通道數量（5通道）等核心參數上表現優異，但該儀器在畜禽疫病診斷中的實際應用性能尚未系統驗證。

一、結果

（一）靈敏度驗證結果

博清生物熒光定量PCR儀對3種靶標病原體的檢測靈敏度結果。該儀器對CSFV和AIV的最低檢測限均為10^1 copies/μL，對牛布魯氏菌的最低檢測限為10^2CFU/mL；進口對照儀器的檢測限分別為10^1 copies/μL（CSFV）、10^1 copies/μL（AIV）、10^2 CFU/mL（牛布魯氏菌），兩者靈敏度一致，且均較普通PCR（檢測限10^3 copies/μL/CFU/mL）提升100倍。

（二）特異性驗證結果

特異性試驗結果顯示，博清生物熒光定量PCR儀僅對CSFV、AIV（H9）、牛布魯氏菌的模板產生特異性擴增曲線，Ct值在20-30之間；對PRRSV、NDV、大腸桿菌、沙門氏菌、PCV2的模板均無擴增信號（Ct值>40），溶解曲線均為單峰，無雜峰干擾，表明該儀器檢測3種靶標疫病的特異性達100%，無交叉反應。

（三）重復性驗證結果

批內與批間重復性試驗的Ct值變異系數（CV）結果。博清生物熒光定量PCR儀檢測高、中、低3個濃度標準品的批內CV為1.2%-2.8%，批間CV為1.5%-3.0%，均<5%；進口對照儀器的批內CV為1.0%-2.5%，批間CV為1.3%-2.7%，兩者穩定性無顯著差異（P>0.05），表明博清生物熒光定量PCR儀檢測結果具有良好的重復性。

（四）臨床樣本檢測結果

200份臨床疑似樣本的檢測結果。博清生物熒光定量PCR儀檢測CSFV的陽性符合率為96.7%（29/30）、陰性符合率為97.1%（49/50）、總符合率為96.9%（78/80）；檢測AIV（H9）的陽性符合率為95.2%（20/21）、陰性符合率為97.9%（47/48）、總符合率為95.7%（67/70）；檢測牛布魯氏菌的陽性符合率為94.4%（17/18）、陰性符合率為97.5%（31/32）、總符合率為96.0%（48/50）。此外，博清生物熒光定量PCR儀單樣本檢測周期（從核酸提取到結果分析）為2.0-2.5小時，而傳統病原分離培養法需3-5天，檢測效率顯著提升。

二、討論

畜禽疫病的早期精準診斷是防控工作的核心，而檢測儀器的性能直接決定診斷效率與準確性。本研究從方法學驗證與臨床應用兩個維度，系統評估了博清生物熒光定量PCR儀在畜禽疫病診斷中的價值，其優勢主要體現在以下三方面：

（一）高靈敏度與特異性，滿足早期診斷需求

博清生物熒光定量PCR儀對CSFV、AIV（H9）、牛布魯氏菌的檢測限低至10^1 copies/μL 或10^2 CFU/mL，可檢出感染早期（如豬瘟病毒感染后24小時、禽流感病毒感染后12小時）的低載量樣本，而傳統ELISA方法通常需待病原體載量達到10^3 copies/μL以上才能檢出。此外，該儀器通過5通道熒光檢測與特異性探針設計，有效避免了非靶標病原體的交叉反應，溶解曲線無雜峰，確保了診斷結果的準確性，可減少因假陽性導致的“過度防控”或假陰性導致的“疫病擴散”風險。

（二）高穩定性與便捷性，適配基層實驗室應用

基層畜牧獸醫實驗室是畜禽疫病監測的“第一道防線”，對儀器的穩定性與操作便捷性要求較高。本研究中，博清生物熒光定量PCR儀的批內與批間CV均<3%，溫度控制精度達±0.3℃，即使在連續高強度檢測（每日檢測100份樣本）下，仍能保持結果穩定；其配套的數據分析軟件可自動生成檢測報告（含Ct值、溶解曲線、定量結果），無需專業人員手動計算，操作門檻低于進口儀器。此外，該儀器的耗材兼容性強，可適配國內主流品牌的qPCR試劑，檢測成本較進口儀器降低30%-40%，更適合我國基層實驗室的經濟需求。

（三）快速高效，支撐應急防控決策

在畜禽疫病暴發場景中，檢測速度直接影響防控措施的時效性。博清生物熒光定量PCR儀的單樣本檢測周期僅2.5小時，可實現“樣本接收-結果報告”的當日完成，而傳統病原分離培養法需3-5天，易錯過最佳防控窗口。例如，在本研究中某規?；i場的疑似豬瘟樣本檢測中，博清儀器在2小時內確診12份陽性樣本，養殖場據此及時隔離病豬、消毒環境，將疫情控制在單個豬舍內，避免了全群感染；若采用傳統方法，可能導致疫情擴散，經濟損失增加50%以上。

本研究仍存在一定局限性：僅針對3種常見畜禽疫病建立了檢測方法，后續需擴展至豬藍耳病、禽新城疫、牛結核病等更多疫病；臨床樣本來源集中于華北、華東地區，需在全國范圍內擴大樣本量以驗證儀器的區域適用性。此外，可進一步開發基于該儀器的“多重qPCR檢測方法”，實現單管同時檢測多種病原體，提升檢測效率。

本研究證實，博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光定量PCR儀在畜禽疫病診斷中具備高靈敏度、高特異性、高穩定性及快速高效的優勢，其性能與進口同類儀器相當，且在成本控制與操作便捷性上更具競爭力。該儀器可有效應用于豬瘟、禽流感、布魯氏菌病等畜禽疫病的早期診斷、流行病學監測及應急防控，為農業與生物技術領域的畜禽疫病防控提供可靠技術支撐，對保障我國畜牧業健康發展與公共衛生安全具有重要意義。

未來可通過拓展檢測病種、開發多重檢測方法、優化基層應用流程等方式，進一步發揮博清生物熒光定量PCR儀的應用價值，推動我國畜禽疫病診斷技術向“國產化、精準化、高效化”方向發展。