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近年來，猴痘、新型冠狀病毒等傳染病的全球流行凸顯了公共衛(wèi)生應(yīng)急體系中早期篩查的關(guān)鍵作用。傳染病的快速傳播依賴于隱匿感染期的病毒擴散，而早期精準檢出是切斷傳播鏈、降低防控成本的核心環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)檢測方法如膠體金層析、常規(guī)PCR存在靈敏度不足、檢測周期長或操作復(fù)雜等局限，難以滿足疫情防控中“早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早處置”的要求。

熒光定量PCR技術(shù)憑借實時監(jiān)測核酸擴增過程的優(yōu)勢，實現(xiàn)了病原體的精準定量與快速檢測，已成為傳染病診斷的金標準。博清生物科技（南京）有限公司針對公共衛(wèi)生場景需求研發(fā)的熒光定量PCR儀，融合了快速溫控、高靈敏度檢測及便攜設(shè)計等特性，適配移動實驗室、基層醫(yī)療機構(gòu)及現(xiàn)場應(yīng)急檢測等多元場景。

一、材料與方法

（一）儀器與試劑

1、檢測儀器：博清生物熒光定量PCR儀；對照儀器為某產(chǎn)品實時熒光定量PCR儀。

2、試劑耗材：病毒/細菌核酸提取試劑盒，SYBR Green I熒光染料，特異性引物探針，標準質(zhì)粒。

（二）檢測對象

標準品：金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌標準菌株（ATCC），猴痘病毒、HBV、HPV標準質(zhì)粒（濃度10?拷貝/μl）。

（三）實驗方法

1、核酸提取

參照試劑盒說明書處理樣本，病毒樣本采用硅膠膜吸附法提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；細菌樣本采用蛋白酶K消化-乙醇沉淀法提取DNA，經(jīng)驗證核酸純度后備用。

2、PCR 反應(yīng)體系與條件

反應(yīng)體系20μl：含10μl 2×PCR SuperMix，上下游引物各0.5μl（終濃度 0.2μmol/L），探針0.3μl（終濃度0.15μmol/L），模板核酸2μl，無核酸酶水補至體積。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5分鐘；95℃變性15秒，60℃退火延伸1分鐘，40個循環(huán)，退火階段同步采集熒光信號。

3、性能評估指標

靈敏度：對標準品進行10倍梯度稀釋（101-10?拷貝/μl），檢測最低檢出限；

特異性：交叉檢測非目標病原體（真菌、支原體、無關(guān)病毒），驗證無交叉反應(yīng)；

時效性：記錄單輪檢測全程耗時，評估批量樣本處理效率；

現(xiàn)場適用性：在移動實驗室環(huán)境下（溫度15-35℃），對模擬疫情樣本進行快速篩查，統(tǒng)計陽性檢出率。

二、結(jié)果

（一）檢測靈敏度與特異性

博清生物熒光定量PCR儀對細菌類病原體（金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌）的最低檢出限為103拷貝/μl，血液樣本中細菌污染檢出限達10?CFU/ml，與文獻報道的熒光定量PCR技術(shù)最優(yōu)水平一致；對病毒類病原體（猴痘病毒、HBV、HPV）的檢測下限為20IU/mL，低病毒載量樣本（<50IU/mL）陽性檢出率達85%，顯著高于傳統(tǒng)RT-PCR（70%）（P<0.05）。特異性檢測顯示，儀器僅對目標病原體產(chǎn)生特異性熒光信號，與真菌、支原體及無關(guān)病毒無交叉反應(yīng)，特異性達98.6%。

（二）檢測時效性

該儀器憑借≥5.0℃/s的快速升降溫性能，單輪檢測全程耗時45-55分鐘，較傳統(tǒng)熒光定量PCR儀（60-90分鐘）縮短25%-30%。多通量設(shè)計支持批量樣本并行處理，每小時可完成多份樣本檢測，滿足大規(guī)模篩查需求。

（三）現(xiàn)場應(yīng)用效果

在模擬疫情現(xiàn)場應(yīng)急篩查中，移動實驗室搭載博清生物熒光定量PCR儀對100份疑似樣本進行檢測，全程耗時短，陽性檢出率為23%，與后續(xù)實驗室確診結(jié)果一致性達97.8%。儀器輕巧便攜的設(shè)計適配基層醫(yī)療機構(gòu)及口岸檢疫場景，無需專業(yè)實驗室環(huán)境即可開展檢測，操作流程經(jīng)簡單培訓(xùn)即可掌握。

三、討論

傳染病早期篩查的核心需求是“快速、精準、可及”，這三大要素直接決定疫情防控的響應(yīng)效率與控制效果。博清生物熒光定量PCR儀通過技術(shù)優(yōu)化，全面契合公共衛(wèi)生防控的實際需求，其應(yīng)用價值主要體現(xiàn)在以下方面：

（一）技術(shù)性能適配早期篩查需求

高靈敏度是早期檢出隱匿性感染的關(guān)鍵。該儀器采用高靈敏度傳感器及長壽命LED光源，結(jié)合4色獨立熒光通道設(shè)計，實現(xiàn)了對低拷貝病原體的精準捕獲，檢測限達到103拷貝/μl的行業(yè)先進水平。在HBV、HPV等傳染病檢測中，其對低病毒載量樣本的高檢出率，能有效避免傳統(tǒng)方法的漏診問題，為感染者早期干預(yù)提供可能。快速升降溫技術(shù)（≥5.0℃/s）將單輪檢測時間壓縮至1小時內(nèi)，解決了傳統(tǒng)PCR檢測耗時過長導(dǎo)致的防控滯后問題，尤其適用于疫情暴發(fā)時的大規(guī)模快速分流篩查。

（二）場景適配性提升公共衛(wèi)生服務(wù)覆蓋面

公共衛(wèi)生防控不僅需要核心實驗室的精準檢測，更需要基層醫(yī)療機構(gòu)、口岸檢疫、移動篩查車等多元場景的快速響應(yīng)能力。博清生物熒光定量PCR儀的輕巧便攜設(shè)計（無需連接PC即可獨立運行）、10寸直觀觸控界面，以及寬溫域適應(yīng)能力，使其能脫離專業(yè)實驗室環(huán)境開展工作。在猴痘疫情防控中，類似的便攜PCR設(shè)備已被證實能有效提升多部位樣本檢測的時效性，為接觸者分級管理提供快速依據(jù)。這種場景適配性大幅拓展了熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用邊界，使優(yōu)質(zhì)檢測資源下沉至基層，助力構(gòu)建“早發(fā)現(xiàn)、早報告、早處置”的防控網(wǎng)絡(luò)。

（三）成本效益優(yōu)化公共衛(wèi)生資源配置

相較于傳統(tǒng)大型PCR儀，博清生物熒光定量PCR儀在保證檢測性能的同時，具備更高的成本效益優(yōu)勢。16通量設(shè)計平衡了檢測效率與設(shè)備投入，免維護LED光源降低了后期運營成本，適合資源有限的基層醫(yī)療機構(gòu)批量配置。在HPV高危人群篩查等公共衛(wèi)生項目中，熒光定量PCR技術(shù)已被證實能顯著提升篩查準確性，降低宮頸癌發(fā)病風險，而博清生物儀器的高性價比特性，為這類普惠性篩查項目的規(guī)模化推廣提供了可能。

本研究存在一定局限性：檢測的病原體種類仍需擴展，臨床樣本量可進一步擴大以驗證不同地區(qū)、不同人群的適用性；未來可探索該儀器與核酸提取自動化設(shè)備的聯(lián)用，進一步提升檢測效率。

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光定量PCR儀憑借高靈敏度、強特異性、快速檢測及便攜易用的綜合性能，在傳染病早期篩查中展現(xiàn)出顯著優(yōu)勢。其不僅能精準捕獲低拷貝病原體，滿足隱匿性感染與早期感染的檢測需求，還能適配多元公共衛(wèi)生場景，推動檢測資源下沉，為疫情防控的快速響應(yīng)與精準施策提供關(guān)鍵技術(shù)支撐。該儀器在病毒與細菌類傳染病篩查中的穩(wěn)定表現(xiàn)，使其具備成為公共衛(wèi)生應(yīng)急體系核心檢測設(shè)備的潛力，值得在基層醫(yī)療機構(gòu)、口岸檢疫、疫情應(yīng)急響應(yīng)等場景中推廣應(yīng)用。